вопросы по исследованию      
   системы гемостаза
горячая линия (044)233-09-19
Комплексное оснащение лабораторий гемостаза,
 профессиональный подбор аппаратуры и реагентов.
         Продажа и сервис
                  тел.
044 - 233 09 19
        моб. тел. 050 - 213 09 19
                             063 - 233 09 19
е-mail:
info@haemostasis.com.ua
Определение времени свертывания
нестабилизированной крови по Ли и Уайту
.
 
Принцип. Определяется скорость образования сгустка в венозной крови при 37° с внесением поправки на то, что перемешивание крови в пробирке искусственно ускоряет процесс коагуляции.
Чаще всего используется двухпробирочный вариант теста, хотя в оригинале определение производится в 3 пробирках.
Ход определения. Две чистые и сухие пробирки, обязательно одинакового размера, устанавливают на водяной бане (37°). Производят венепункцию широкой сухой иглой, под которую подставляют первую пробирку. При появлении
крови из иглы включают секундомер. Набирают в первую пробирку 1 мл крови и подставляют под иглу вторую пробирку, замечая по
секундомеру время поступления в нее первой порции крови. Во вторую пробирку набирают то же количество крови, что и в первую. Обе
пробирки немедленно устанавливают на водяную баню. После этого через каждые 30 секунд наклоняют первую пробирку на 60-70° до того
момента, пока в ней не произойдет свертывание и кровь при наклоне перестанет перемещаться в пробирке. При этом вторая пробирка останется
неподвижной. После того, как по секундомеру отмечено время свертывания крови в первой пробирке, начинают наклонять через каждые 30
секунд вторую пробирку и регистрируют время свертывания находящейся в ней крови. В момент полного свертывания выключают секундомер.
Примечание. В трехпробирочном тесте после второй пробирки по той же методике, следят за свертыванием крови в третьей пробирке.
     Интерпретация результатов. Интервал времени от момента запуска секундомера (т. е. от поступления первой порции крови в пробирку №
1) до свертывания крови во второй пробирке характеризует общее время спонтанного свертывания венозной крови при контакте со стеклом.
  Во второй пробирке кровь свертывается позже, чем в первой, так как до наступления свертывания в первой пробирке она остается
неподвижной и на кровь не действует перемешивание, ускоряющее коагуляцию в пробирке № 1. Прибавляя к времени свертывания крови в
первой пробирке дополнительный интервал, отражающий запаздывание процесса во второй пробирке, мы тем самым вносим поправку на
турбулентное движение крови.
Для большей точности из этого общего времени свертывания можно вычесть разницу во времени между сроками поступления крови в первую
и вторую пробирки, хотя такая поправка в большинстве случаев существенно не влияет на конечные результаты исследования.
 Пример
 Время поступления крови в первую пробирку (начало отсчета времени)  0 сек, во вторую пробирку  22 сек; время свертывания (от начала отсчета): в первой пробирке  5 мин 20 сек, во второй пробирке  8 мин 40 сек. Общее время свертывания  8 мин 40 сек, а с поправкой на более позднее поступление крови во вторую пробирку: 8 мин 40 сек  22 сек = 8 мин 18 сек.
Нормальное время свертывания: в первой пробирке  5-10 мин, во второй пробирке  8 - 12 мин. Нормальный суммирующий показатель  8-12 мин.
  Время свертывания крови  простейший общий коагуляционный тест, выявляющий наиболее грубые нарушения в системе свертывания крови. Удлинение времени свертывания может быть связано с выраженным дефицитом одного или нескольких факторов свертывания либо с избытком в крови антикоагулянтов (гепарина и др.). В наибольшей степени на показаниях теста отражается дефицит факторов, участвующих во внутреннем механизме образования протромбиназы (XII, XI, IX и VIII факторов), а также фибриногена. Однако данная проба выявляет наиболее тяжелые формы такой патологии, поскольку при уровне VIII, IX и других факторов выше 4% нормы, время свертывания становится, как правило, нормальным. Поэтому данный тест не пригоден для выявления легких форм гемофилии, для контроля достаточности заместительной терапии и предоперационной подготовки больных.
  Увеличение времени свертывания крови отмечается при беременности (физиологическое), постгеморрагической анемии, тромбоцитопатиях, тромбостении, лейкозах, циррозе печени, гипо- и апластических состояниях, тромбоцитопенической пурпуре, ангиогемофилии, дефиците плазменных факторов (афибриногенемии, гемофилии А и В, протромбинемии, гипоакцелеринемии, снижении содержания фактора VII и др., отравлении веществами, вызывающими асфиксию (фосгеном, ипритом), снижении сопротивляемости капиллярной стенки к травме, длительном применении некоторых лекарственных средств (ацетилсалициловой кислоты).
  Уменьшение времени свертывания крови наблюдается при гемофилии, апластической анемии.
При диссеминированном внутрисосудистом свертывании крови (тромбогеморрагических синдромах) тест выявляет вначале кратковременную гиперкоагуляцию (немедленное свертывание крови в игле либо на протяжении первой минуты в пробирке), а затем  длительный период гипокоагуляции, вплоть до полной несвертываемости крови.
В основном проба используется для экспресс-диагностики наиболее тяжелых нарушений свертываемости крови. По точности и воспроизводимости она лучше других методов исследования времени свертывания крови (в том числе и ряда однопробирочных модификаций методики Ли и Уайта, см. ниже), но по чувствительности намного уступает современным стандартизированным методикам исследования гемокоагуляции.
  Варианты методики:
1. Тест может выполняться и при комнатной температуре, но точность и воспроизводимость результатов при этом, естественно, намного снижаются. Нормальное время свертывания при комнатной температуре: в первой пробирке  5 - 10 минут, общее время свертывания  12 - 16 минут.
2. В литературе часто рекомендуются однопробирочные методы определения (либо параллельно в двух пробирках, но при их одновременном покачивании, с вычислением средней величины времени свертывания). Эти методы не могут считаться модификацией теста Ли и Уайта, так как в них не учитывается главная особенность данного метода  внесение поправки на турбулентное движение крови. Тем не менее, для экспресс-диагностики наиболее тяжелых нарушений гемостаза может быть использована и одна из таких модификаций (см. ниже).
3. Значительно менее точные, чем основной тест  микрометоды, в которых используются небольшие количества крови (0,1 - 0,2 мл), но они удобны для применения в педиатрической практике и в тех случаях, когда у больного не удается получить достаточное количество венозной крови.
  Микрометод. Принцип. Определяется время свертывания венозной крови при 37°. Используются малые количества крови, поправка на перемешивание крови в пробирке не вносится.
  Ход определения. Сухой иглой, без шприца, из локтевой вены берут кровь в две сухие стеклянные пробирки (10х1 см), в каждую по 0,1 мл. Первые капли крови выпускают на ватный тампон. Секундомер включают сразу же при поступлении первой порции крови в пробирку. Пробирки с кровью ставят на водяную баню (37°). Через 2 мин после включения секундомера, а затем через каждые 30 сек, обе пробирки наклоняют на 50 - 60°. Пока кровь не свернулась, она при таком наклоне растекается по стенке пробирки. При наступлении свертывания растекание крови прекращается. В этот момент выключают секундомер.
Время свертывания выражается в минутах по среднему показателю из двух определений (в 1 и 2 пробирках).
  Интерпретация результатов. Нормальное время свертывания варьирует у человека в пределах 5 - 10 мин. При гипокоагуляции оно удлиняется, при гиперкоагуляции  укорачивается.
Тест менее точен, чем классический метод Ли и Уайта, так как в нем малое количество крови контактирует с большой площадью поверхности стекла, а также не вносится поправка на турбулентное движение крови в пробирке. Однако для экспресс-диагностики наиболее тяжелых нарушений свертываемости крови, особенно в случаях, когда трудно получить достаточно большие количества ее, он может быть использован.
Диагностическое значение теста такое же, как и метода Ли и Уайта.
  Макрометод. Принцип. Тот же, что и у предыдущего теста.
  Ход определения. Такой же, как и в предыдущем тесте, но в пробирки набирают по 1,0 мл венозной крови.
Нормальные показатели: 4 мин 55 сек - 11 мин 55 сек (в среднем - 8 мин 25 сек ± 2 мин 02 сек).
  Интерпретация результатов. Такое же, как и у других методов исследования общего времени свертывания крови.
Тест менее точен, чем классический метод Ли и Уайта, так как в нем не учитывается влияние на процесс свертывания турбулентного движения крови в пробирке при покачивании. Выполнение теста при комнатной температуре еще более снижает точность и воспроизводимость исследования.
Показания всех общих коагуляционных тестов, включая общее время свертывания крови, в значительной степени зависят от свойств лабораторной посуды: степени ее чистоты, контактной активности разных образцов стекла и ряда других свойств. Поэтому, значительно более точные и воспроизводимые данные дают исследования, проводимые в условиях стандартизированной контактной активации: при взятии крови силиконированной иглой в силиконированные пробирки (минимальный контакт) или в пробирки с легким каолином (5 - 10 мг/мл), что стандартизирует пробу, создавая максимальный контакт (см.
активированое время свертывания).