вопросы по исследованию
         системы гемостаза
горячая линия
(044) 233-09-19
         Продажа и сервис
                  тел.
044 - 233 09 19
        моб. тел. 050 - 213 09 19
                             063 - 233 09 19
е-mail:
info@haemostasis.com.ua
Комплексное оснащение лабораторий гемостаза,
 профессиональный подбор аппаратуры и реагентов.
                                                        Инструкция по использованию реактива Helena Thromboplastin-Li.
Назначение.
Первый стандартизованный одностадийный тест протромбинового времени был предложен д-ром Армандом Квиком в 1935г. Сейчас он стал
основным скрининговым тестом при диагностике врожденного и приобретенного дефицита факторов свертывания по внешнему пути (факторы
II, V, VII и X). Он также используется для инициирования и мониторинга терапии оральными антикоагулянтами, и также может быть
использован при оценке уровня белкового синтеза печенью при хронической или острой печеночной недостаточности.
   Helena
Thromboplastin-Li (TP-Li) выделен из мозга кролика, но сходен с человеческим BCT по значению Международного Индекса
Чувствительности (МИЧ). МИЧ Helena TР-Li примерно равен 1.1 (при использовании ручного метода калибровки) и откалиброван относительно
международного референса. Helena TР-Li особенно подходит для мониторинга терапии оральными антикоагулянтами и,  вместе с
соответствующей фактор-дефицитной плазмой, для измерения активности факторов внешнего пути свертывания. Тканевый тромбопластин, в
присутствии ионов кальция, является активатором внешнего пути свертывания крови. При добавлении смеси тканевого тромбопластина с
кальцием к нормальной цитратной плазме активируется механизм свертывания, приводящий к образованию фибринового сгустка. Если имеет 
место дефицит факторов внешнего пути, то время, необходимое для образования сгустка будет удлиняться тем сильнее, чем тяжелее дефицит
факторов.
Меры предосторожности.
   Реактивы, содержащиеся в наборе, предназначены только для in-vitro диагностики. Не принимать внутрь! При работе с компонентами набора
следует надевать перчатки. Ознакомьтесь с инструкцией продукта по мерам предосторожности. Плазменные продукты были проверены на
содержание (если другого не указано на упаковке) антигенов к гепатиту B (HBsAg), HIV1,2 и HCV антител c отрицательным результатом, тем не
менее, при работе следует обращаться с ними с той же осторожностью, что и с образцами плазмы человека. 
Состав.
1.    реактив Helena TP-Li
Каждый флакон содержит суспензию тромбопластина, выделенного из мозга кролика.  Содержимое флакона нужно хорошо перемешивать перед
и во время использования. Реактив является суспензией мозговой ткани кролика.
2.    Раствор кальция хлорида.
Каждый флакон содержит 0,25М раствор хлорида кальция. Реактив представляет собой прозрачный, бесцветный раствор.
3.    Другие компоненты набора.
Каждый набор содержит инструкцию по применению с указанием рефересных значений для данного набора.
Хранение и срок годности.
Запечатанные флаконы годны к применению до срока, указанного на упаковке при соблюдении условий хранения.
1.    Helena TP-Li
Вскрытые флаконы годны к применению в течение 1 месяца при температуре хранения 2ч60С, 5 дней при 15ч300С. Готовый для использования
реактив (смешанный с хлоридом кальция) можно использоать в течение 10 дней при температуре 2ч60С или 5дней при температуре 15ч300С.
Не
замораживать!
Признаки ухудшения качества: большое скопление частиц или отличия от ожидаемых значений могут означать ухудшение
свойств реактива.
2.    Раствор кальция хлорида
Вскрытые флаконы годны к применению в течение месяца при температуре 2ч60С или 5 дней при температуре 15ч300С. Признаки ухудшения
качества: дисперсная взвесь, хлопья или отличия от ожидаемых значений могут означать ухудшение свойств реактива.
Требуемые, но не поставляемые материалы.
Cat. No. 5519 Плазма-калибратор.
Сбор и приготовление образцов.
  Следует использовать только пластиковые или силиконизированные стеклянные пробирки. Кровь забирается в пробирку с цитратным
антикоагулянтом (3.2% или 3.8% цитрат натрия) в соотношении 9:1. После центрифугирования при оборотах 2000ч3000 * g в течение 15 минут
отделить плазму. Плазму следует хранить при температуре 2ч60С. Тестирование должно быть проведено в течение 2 часов после забора
образцов,  либо  плазму можно заморозить и хранить при температуре -200С в течение 2 недель или при -700С в течение 1 месяца. Разморозить
быстро при 370С перед проведением измерений. Не держать при 370С более 5 минут.
Пошаговая последовательность действий.
  Для достоверного вычисления МНО рекомендуется определить специфическое для лаборатории значение МИЧ реактивов, используемых в
тестировании. Helena BioSciences Europe рекомендует для этих целей плазму-калибратор (Cat. No. 5519). Подобная процедура должна быть
проведена для каждой новой партии реактивов. Для вычисления сдвига в локальном системном МИЧ, который наблюдается в связи с
изменением температуры в лаборатории, особенностями технического обслуживания прибора, среди прочих местных различий, предлагается
использовать Helena BioSciences Europe МИЧ-референс (Cat. No. 5490).
Для точного определения протромбиновой активности  (%ПТ) рекомендуется калибровать прибор при рутинном использовании, используя
Helena BioSciences Europe протромбин-калибратор (Cat. No. 5504).  Не рекомендуется использование серии разведений референсной плазмы для
получения графика зависимости (%ПТ) от времени свертывания, так как это может привести к неточности, вызванной низким содержанием
фибриногена в разведениях рефересной плазмы, которое не отражается в образцах пациентов, в основном, имеющих нормальный уровень
фибриногена.
 
1. Ручной метод.
а) Смешать достаточное количество Helena TP-Li и раствора хлорида кальция для получения смеси, необходимой для проведения тестирования в
течение дня и инкубировать при 370С не более 8 часов.
б) Прогреть 0,1 мл тестируемой плазмы при 370С в течение 2 минут.
в) Добавить 0,2 мл свежеприготовленного тромбопластин-реактива к плазме и немедленно включить таймер.
г) Заметить время, необходимое для  образования сгустка с точностью до 0,1сек.
2. Автоматизированный метод.
а) Обратитесь к руководству пользователя вашего оборудования для получения детальных инструкций.
Интерпретация результатов.
Результаты должны быть представлены  с точностью до 0,1 сек и разница в повторах не должна превышать 5%. МНО может быть вычислено по
формуле:
МНО= {ПВ (пациента)\среднее ПВ (норма)}МИЧ
Значение (%ПВ) может быть найдено из калибровочного графика (график зависимости (%ПВ) от измеренного времени), который должен быть
строго линейным в двойных логарифмических координатах.
Контроль качества.
Каждая лаборатория должна установить программу контроля качества. Перед измерением каждой партии образцов пациентов необходимо
протестировать нормальную и абнормальную плазму, чтобы удостовериться в удовлетворительной работе оборудования и оператора. Если
контрольные измерения не совпадают с ожидаемыми значениями, то измеренные данные пациентов следует считать недостоверными.
Helena BioSciences Europe предлагает следующие контрольные реактивы:
Cat. No. 5186 Norm-Trol 1 10 x 1ml
Cat. No. 5499 Norm-Trol 1 10 x 3ml
Cat. No. 5187 Ab-Trol 2 10 x 1ml
Cat. No. 5183 Ab-Trol 3 10 x 1ml
Cat. No. 5490 INR Reference Set 12 x 0.5ml
Референсные значения.
Референсные значения могут варьировать между лабораториями в зависимости от
используемых методов и анализаторов. В связи с этим каждая лаборатория должна определить свою собственную область нормальных значений.
Это крайне важно для локальной МИЧ-калибровки. При использовании ручного метода  («наклонная пробирка») нормальные значения лежат в
диапазоне 12,5ч16,5 секунд.
Область терапевтических значений.
Британское Общество по Гематологии рекомендует следующие диапазоны значений МНО для разных клинических условий:
МНО        Клиническое состояние
2.0-2.5     Профилактика тромбоза глубоких вен, включая оперативное вмешательство для пациентов с высоким риском (2.0-3.0 для операций на
тазобедренном суставе и операций на бедренной кости).
 
2.0-3.0     Лечение тромбоза глубоких вен. Легочная эмболия. Системная эмболия. Предупреждение венозной тромбоэмболии при инфаркте
миокарда. Митральный стеноз с эмболией. Периодические ишемические атаки. Фибрилляция предсердий.
 
3.0-4.5     Повторяющиеся тромбоз глубоких вен и легочная эмболия. Поражение артерии, включая инфаркт миокарда. Механическое
протезирование сердечных клапанов.
(В последнее время этот диапазон сокращен до 2,5-3,5, в связи с тем, что риск кровотечений при
МНО=4,5 значительно выше чем риск тромбозов при МНО=3,5. Примечание ред. сайта)
Показатели.
Последующие измерительные характеристики были определены Helena BioSciences или их представителями как  стандарты. Каждая лаборатория
должна определить свои собственные значения.
Воспроизводимость (с использованием Behnk RackRotor):
Воспроизводимость в пределах определения
время свертывания, сек.         коэф. вар. внутри пробы, %
n=10         17.0                     0.92
n=10         26.9                     1.09
Воспроизводимость между определениями
время свертывания, сек.         коэф. вар. между пробами, %
n=100         13.7                     2.09
n=100         23.0                     2.38
n=100        25.6                     2.15
Воспроизводимость между партиями
время свертывания, сек.         коэф. вар. между пробами, %
n=3         13.1                     2.0
n=3         27.3                     3.3
n=3        44.0                     2.2
Сравнение метода.
Сравнение значений МНО, определенных с помощью Helena TР-Li и двумя другими референсами тромбопластина дало следующие
корреляционные соотношения:
TР-Li = 0.9936 (RTF95) + 0.0129
r2= 0.9834    n = 79
TР-Li = 0.9589 (BCT441) + 0.1543
r2= 0.9500    n = 79
Литература:
1. Quick, A.J. 'A Study of the Coagulation Defect in Hemophilia and
Jaundice', Am. J. Med. Sci., 1935; 190: 501.
2. Biggs, Rosemary (Ed.), Human Blood Coagulation, Haemostasis
and Thrombosis, 2nd Edition, Blackwell Scientific Publications,
London, 1976.
3. Hirsh, J., Poller, L., Deykin, D., Levine, J. and Dalen, J.E.,'Optimal
Therapeutic Range for Oral Anticoagulants', Chest, 1989, 95: 5S11S.
4. Poller, L. ' Laboratory Control of Anticoagulant Therapy', Sem.
Thromb. Haemostasis, 1986; 12: 13-19.
5. World Health Organisation. Expert Committee on Biological
Standards 1984. Technical Series 700:19.
6. Poller, L., Triplett, D.A., Hirsh, J., Carroll, J. and Clarke, K. 'The
value of plasma calibrants in correcting coagulometer effects on
International Normalised Ratios (INR): An international
multicentre study' Amer. J. Clin. Pathol., 1995,103 : 358-365.
7. Poller, L., Triplett, D.A., Hirsh, J., Carroll, J. and Clarke, K. OA
comparison of lyophilised artificially depleted plasmas and
lyophilised plasmas from warfarin treated patients in correcting
for coagulometer effects on International Normalised RatiosO
Amer. J. Clin. Pathol., 1995, 103 : 366-371.
8. The British Society for Haematology, 'Guidelines on Oral
Anticoagulation: Second Edition', J. Clin. Pathol., 1990; 43 : 177183.
La premiere methode de determination standardisee du temps de
prothrombine en une etape a ete developpee en 1935 par le Dr.