вопросы по исследованию
         системы гемостаза
горячая линия
(044) 233-09-19
         Продажа и сервис
                  тел.
044 - 233 09 19
        моб. тел. 050 - 213 09 19
                             063 - 233 09 19
е-mail:
info@haemostasis.com.ua
Комплексное оснащение лабораторий гемостаза,
 профессиональный подбор аппаратуры и реагентов.
                                                               Инструкция к набору "Количественное определение фибриногена" (кат. № 5376).
Fibrinogen Assay Kit. Cat. No. 5376
Thrombin Reagent (5 x 2ml). Fibrinogen Calibrator(2 x 1ml). Owrens Veronal buffer (2 x 25 ml).
I. Применение
Тест-система предназначена для проведения количественного определения фибриногена по Клауссу в плазме кровм человека.
Метод Клаусса - простой метод количественного определения фибриногена, основанный на измерении времени образования сгустка. Метод проводится в разведенной плазме после добавления тромбинового реагента (> 30 единиц/мл NIH).
Время образования сгустка пропорционально концентрации фибриногена. Уровень фибриногена может увеличиваться при воспалении, беременности или при приеме оральных контрацептивов. Низкие значения могут наблюдаться при заболеваниях печени и ДВС. Для диагностики врожденных дефицитных состояний, включая афибриногенемию (полное отсутствие фибриногена), гипофибриногенемию (концентрация фибриногена менее 1 мг/мл) и дисфибриногенемию (структурные нарушения в молекуле фибриногена).
II. Меры предосторожности
Реактивы, содержавшиеся в этом наборе, предназначены только для диагностики in vitro. Не принимать внутрь.
При работе с любым из компонентов набора реагентов применяйте соответствующую защитную одежду. Ознакомьтесь с инструкцией продукта по мерам предосторожности. В реактивах не содержится антигенов к гепатиту В (HBsAg), Anti-HCV и HCV антителам. Рассматривайте реактивы как источник потенциальной биологической опасности и, в связи с этим, применяйте все меры предосторожности.
III. Реактивы
1.    Тромбиновый реактив.
Каждый флакон содержит приблизительно 200 единиц/мл NIH бычьего тромбина со
стабилизаторами.
Приготовление. Растворите каждый пузырек в 2,0 мл коалиновой суспензии (0,5 г/л). Аккуратно перемешайте. Убедитесь в полном растворении
реактива. Тромбиновый реагент можно использовать через 15 минут после приготовления. Не трясти.
2.    Калибратор фибриногена.
Каждый флакон содержит 1мл лиофилизированной и стабилизированной человеческой плазмы
для измерения фибриногена.
Приготовление. Растворить каждый пузырек в 1 мл дистиллированной воды, аккуратно перемешать и дать отстояться в течение 10 минут при
комнатной температуре. Перемешивать перед использованием. Не трясти.
3.   
Оуренс буфер.
Каждый флакончик содержит 25мл буфера, содержащего барбитал, натрия хлорид и натрия азид в качестве стабилизатора. Буфер готов к
применению.
4.   
Другие компоненты набора.
Также в набор входит инструкция по применению. Референсные значения для калибратора указаны во вкладыше.
IV.    Хранение и стабильность
Запечатанные реагенты устойчивы до срока годности, указанного на флаконе или упаковке.
1.    Тромбиновый реактив
После приготовления, реактив устойчив в течение 8 часов при комнатной температуре или 1 неделю при 2-8 С.
2.    Калибратор фибриногена
После приготовления, реактив устойчив в течение 4 часов при 2+6°С. Избегать загрязнения.
3.    Оуренс буфер
Вскрытые флаконы следует хранить при 2-6 С.
V.    Забор и приготовление образцов
Используйте пластиковые или силиконизированные пробирки. Кровь (9 частей) должна быть собрана с антикоагулянтом (1 часть) цитратом натрия 3,8 % или 3,2 %. Отделите плазму после центрифугирования при 2000-3000 g, в течение 15 минут. Плазма должна храниться при температуре 2-6°С. Анализ необходимо проводить в течение 2 часов после отбора проб, либо плазма может быть заморожена при -20°С и храниться в течение 2 недель или при -70°С в течение одного месяца. Перед проведением анализа необходимо разморозить плазму при 37°С. Не держите плазму при 37°С больше 5 минут.
VI.    Пошаговое руководство
Реактивы   подходят   для   использования   на   любом   коагулометре,   пригодном   для выполнения анализа фибриногена по методу Клаусса.
За детальной инструкцией обратитесь к Руководству Оператора и/или используйте инструкцию производителя реагентов. Подготовьте все
реактивы.
Калибровка.
Новая калибровка должна использоваться при изменении номера партии реагентов или если ожидаемые значения контроля выходят за пределы
референсных значений. Разведите калибратор Оуренс-буфером как указано в таблице.
 
 
Аккуратно перемешайте.
Приготовление образцов.
Смешайте 1 часть плазмы пациента или контроля с 9 частями вероналового буфера.
Анализ.
1.    Выполняйте все тесты в дубле. Отберите пипеткой 0,2 мл стандарта, пробы пациента или контроля в реакционную пробирку и инкубируйте в
течение 2 минут при 37°С.
2.    Добавьте 0,1 мл тромбинового реактива (15
ч 30°С).
3.    Определите время свертывания с точностью 0,1 секунды.
4.    На миллиметровой бумаге (вложенной в набор реагентов) отложите по оси Y значения: (концентрация фибриногена), а по оси X значения:
(время свертывания стандарта).
5.    Должна быть получена прямая линия. Определите значения калибратора фибриногена в разведении 1+9, интерполируйте полученное
значение с целью контроля стандартной кривой.
VII.    Контроль качества
Каждая лаборатория должна установить программу контроля качества. Нормальный и патологичный контроль должен проводиться с каждой
партией образцов пациентов, чтобы гарантировать работу анализатора и оператора. Компания Helena предлагает следующие контроли: кат ном
5301 SAC 1. кат ном 5302 SAC 2. кат ном 5186 Norm-Trol 1. кат ном 5187 Ab-Trol 2. кат ном 5183 Ab-Trol 3.
VIII.    Референсные значения
Референсные значения могут меняться между лабораториями в зависимости от используемых методов и анализаторов. По этой причине каждая лаборатория должна установить свои собственные референсные значения. Ожидаемые значения для фибриногена у здоровых взрослых доноров составляют 150-350 мг/дл (1,5-3,5 г/л).
IX.    Ограничения
Уровень гепарина > 0,6 ед/мл и продуктов деградации фибрина > 100мг/мл может привести к получению ложно заниженных результатов. Если значения некоторых пациентов выпадают из калибровочной кривой, то проведите повторный анализ, используя соответствующее разведение, чтобы привести значения в стандартный диапазон.
X.    Аналитические характеристики
Приведенные характеристики должны рассматриваться только как пример.
Каждая лаборатория должна их устанавливать сама.
Линейность этого метода лежит в диапазоне 1.5ч6.5 г/л.
Воспроизводимость.
Между аналитическими сериями:
Фибриноген (g/L) =3,64 CV=4,87 n=10
Внутри аналитической серии:
Фибриноген (g/L) =3,61 CV=3,78 n=10
XII. Литература
1.    Clauss, A.,'Gerinnungsphysiologische Schnell-methode zur Bestimmung des Fibrinogens' Acta Haematol., 1957, 17 : 237-246.
2.    Shaw, T. S.,'Assays for Fibrinogen and its Derivatives' CRC Crit. Rev. Clin. Lab. Sci., 1977, 8: 145-192.
3.    Scully, R. E. et al.,'Normal Reference Laboratory Values', N. Eng. J. Med., 1980, 302(37) : 37-48.
4.    Okuno, T. et Selenko, V., Amer. J. Med. Tech., 1972, 38(6): 196-201.